UF2471 Análisis de Ácidos Nucleicos

UNIDAD FORMATIVA 1. ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS

UNIDAD DIDÁCTICA 1. METODOLOGÍA APLICADA AL ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS

1. Extracción. Purificación y análisis espectroscópico y electroforético de ácidos nucleicos.
2. – Material y métodos
3. Amplificación de ADN mediante PCR y variantes.
4. – El ADN
5. – Los enzimas
6. – Los nucleótidos
7. – Los cebadores
8. – Limitaciones y problemas de la PCR (tamaño secuencias limitado, PCR previa, contaminación, inespecifidad de cebadores,…)
9. Electroforesis y técnicas relacionadas.
10. – Factores que afectan a la movilidad del ADN en el gel (masa molecular, voltaje, composición de las bases, temperatura, solución amortiguadora,…)
11. – Tipos de electroforesis: PFGE (Pulsed Field Gel Electroforesis), OFAGE (Orthogonal Field Alternative Gel), FIGF (Field Inversion Gel Electroforesis), CHEF (Contour Clamped Homogeneus Electric Field), Electroforesis preparative.
12. – Aplicaciones: Análisis comparativos de patrones de restricción cromosómicos, construcción de mapas cromosómicos, topología y tamaño de cromosomas, análisis de elementos extracromosómicos
13. Hibridación de ácidos nucleicos.
14. – Factores que influyen en la hibridación.
15. – Composición de las bases.
16. – Concentración de ADN/ARN y tiempos Cot y Rot
17. – Concentración y tamaño de la sonda
18. – Concentración ADN diana
19. – Desnaturalización del ADN diana y fijación a un soporte.
20. – Marcaje de una sonda monocadena
21. – Hibridación: mezcla y renaturalización
22. – Detección de los híbridos
23. – Medio de reacción
24. – Polímeros inertes
25. – Tiempos de hibridación y mecanismos de detección.
26. – Tipos de hibridación (soporte sólido, en fase líquida, in situ, in situ sobre cromosomas, in situ de bacterias para clonaje).
27. Análisis de fragmentos de ADN.
28. – Método Southerm
29. – Métodos de transferencia (por capilaridad, por vacío, electroforético)
30. – Aplicaciones del Método Southerm
31. – Mapas de restricción
32. – Detección de polimorfismos (RFLP, VNTR, STR) y deleciones.
33. Secuenciación.
34. – Secuenciación química, método de Maxam y Gilbert
35. – Secuenciación enzimática, método de Sanger o de los dideoxinucleótidos.
36. – Tipos de secuenciaciones enzimáticas (Cíclica, múltiple, automática, quimioluminiscente)
37. Tecnología de microarrays y chips de ácidos nucléicos.
38. – Utilidad: analizar el genoma completo de un organismo
39. – Fundamento: hibridación con sondas
40. – Soporte: placas microtitulación o membranas de blotting
41. – Fabricación: pueden ser creados en el laboratorio o usando robótica : Macroarray: señales > 300 micras y Microarray: pocillos < 200 micras
42. Aplicaciones: identificación de secuencias (genes, Mutaciones), determinación del nivel de expresión génica, descubrimiento de genes, diagnóstico de enfermedades, Farmacogenómica: desarrollo de Fármacos y Toxicogenómica: investigación Toxicológica
43. Bioinformática. Bases de datos de genómica.
44. – Introducción a la Bioinformática
45. – Consulta de Bases de datos en biología molecular
46. – Alineamiento de secuencias
47. – Predicción de genes
48. – Introducción a los microarrays de DNA

UNIDAD DIDÁCTICA 2. PRINCIPIOS GENERALES DE ENFERMEDADES DE BASE GENÉTICA

1. Genoma: células, cromosomas y genes.
2. – Definición de genoma, gen y cromosoma
3. – Organización, estabilización y localización del genoma
4. Estructura y función de los genes y cromosomas.
5. – Estructura del ADN
6. – Estructura del ARN
7. – El código genético
8. – Secuencias codificantes versus no codificantes
9. Bases cromosómicas de la enfermedad.
10. – Citogenética. El cariotipo normal en los roedores de laboratorio
11. – Anomalías del número de cromosomas (Heteroploidías)
12. – Anomalías de la estructura de los cromosomas
13. Herencia y enfermedad: enfermedades monogénicas, patrones de herencia, enfermedades poligénicas. Susceptibilidad genética.
14. – Genético
15. – Congénito
16. – Hereditario
17. Genética de las enfermedades comunes.
18. – Modelos provenientes de mutaciones espontáneas o inducidas
19. – Modelos generados por transgénesis
20. – Modelos generados in Vitro por manipulación de células ES
21. – Modelos generados por transgénesis condicional
22. Genética de la reproducción y del diagnóstico prenatal.
23. – Modelos animales del desarrollo embrionario
24. – Diagnóstico prenatal rápido de aberraciones cromosómicas por PCR
25. – Diagnóstico citogenético
26. – Diagnóstico prenatal de enfermedades hereditarias
27. Diagnóstico en medicina legal y forense.
28. – VNTR
29. – STR
30. Modelos animales de enfermedad de base genética.
31. – Modelos murinos de enfermedades hereditarias simples (mendelianas): Desórdenes de la visión, de la audición, neurológicos y neuromusculares. Enfermedades de los huesos y cartílagos, de la piel y el pelo, hematológicas, inmunodeficiencias y metabólicas
32. – Modelos murinos de enfermedades hereditarias complejas (multigénicas): Cáncer, obesidad, diabetes, etc.